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時間分辨熒光微孔板超敏檢測技術(shù)平臺
靈敏度不夠？試試我吧！
原理簡介
熒光標記和檢測技術(shù)在生命科學、醫(yī)學、免疫學等領(lǐng)域有著極為廣泛的應用。然而，傳統(tǒng)的熒光分析易受到非特異性熒光的干擾?，F(xiàn)使用的熒光標記物大多為各種有機染料分子，由于其激發(fā)波長與發(fā)射波長靠近，Stokes位移小(20-30nm)，檢測時容易受到激發(fā)光的干擾。另外，背景熒光及散射光幾乎覆蓋整個熒光發(fā)射光譜的范圍(350-600nm)，將產(chǎn)生非特異性熒光干擾。傳統(tǒng)的有機熒光試劑還容易發(fā)生光漂白及淬滅效應，導致熒光強度降低。這些不足限制了這種方法靈敏度的進一步提高。
時間分辨熒光是一種更先進的熒光分析方法。其原理是采用較長熒光半衰期的稀土化合物作標記物，由于這種標記物的Stokes位移大(＞150nm)且熒光壽命比本底物質(zhì)熒光壽命高5～6個數(shù)量級，因此，測定時只要延緩測量時間，待本底物質(zhì)的熒光充分衰減后再測定標記物的信號就可有效地消除各種非特異性熒光的干擾，獲得高的靈敏度。目前基于溶解增強原理的時間分辨熒光(DELFIA)在免疫分析中已得到較廣泛的應用。
但是，在DELFIA分析中，稀土螯合物被標記后，測定時需加入熒光增強液將標記的稀土離子解離釋放出來后，在相對疏水的環(huán)境中生成能產(chǎn)生高熒光強度的稀土增強劑螯合物再進行熒光測定，操作步驟相對比較繁瑣，實現(xiàn)自動化對儀器的要求更高，精密度也更難控制。
DELFIA反應原理圖
與經(jīng)典的時間分辨熒光免疫分析方法DELFIA法不同，微測生物開發(fā)的時間分辨熒光微孔板技術(shù)平臺采用熒光納米微球作為標記物，每個微球中可包裹成千上萬個熒光分子，大大提高了標記效率，有效的提高了靈敏度；同時納米熒光微球表面修飾有合適密度的羧基，用于與蛋白或抗體的共價偶聯(lián)，提高標記物的穩(wěn)定性。 更重要的是由于納米微球包埋的銪離子已經(jīng)經(jīng)過了螯合，無需解離增強步驟，因此反應完后只需洗滌幾次后即可進行熒光測定，操作步驟比DELFIA簡單很多，更容易實現(xiàn)自動化操作。
微測生物時間分辨熒光微孔板反應原理圖
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三、微測微測微孔板技術(shù)平臺的特點
